بهينه‌سازي توليد پپتيبادي روميپلاستيم نوترکيب در اشرشيا کلي

شهبازي آذر, صالح and حسني کومله, سيدحسن and يامچي, احد and شهبازي, مجيد (2023) بهينه‌سازي توليد پپتيبادي روميپلاستيم نوترکيب در اشرشيا کلي. مجله مطالعات علوم پزشکي, 34 (9).

Text 5 Shahbazi Azar A-10-5487-1.pdf Download (824kB)

Abstract

روميپلاستيم يک پروتئين پيوندي است که در بدن عملکردي مشابه با پروتئين ترومبوپويتين دارد و بدين‌وسيله باعث تحريک مغز استخوان براي ساخت بيش‌تر پلاکت مي‌شود. ترومبوپويتين هورموني است که توليد پلاکت را کنترل مي‌کند. داروي روميپلاستيم در درمان ترومبوسيتوپني در بيماران داراي ايميون ترومبوسيتوپني مزمن (ITP) زماني که ساير داروها مانند گورتيکواستروئيدها و ايمنوگلوبولين‌ها و يا عمل جراحي برداشتن طحال جواب نداده باشد، استفاده مي‌شود. هدف از اين مطالعه، کلونينگ و بهينه‌سازي شرايط بيان ژن و خالص‌سازي پپتيبادي روميپلاستيم نوترکيب در باکتري اشرشيا کلي بود. مواد و روش کار: در اين مطالعه کاربردي، متغيرهاي مستقل مورداستفاده شامل ميزان OD (4/0، 8/0 و 2/1) در طول‌موج 600 نانومتر، غلظت IPTG (5/0، 1 و 5/1 ميلي مولار) و نوع محيط کشت (LB, TB, M9) بودند که از روش سطح پاسخ (RSM (Response Surface Methodology) در قالب طرح مرکب مرکزي با نرم‌افزار Design-Expert 12 براي پيش‌بيني متغيرهاي مستقل بر ميزان توليد روميپلاستيم استفاده گرديد. يافته‌ها: ميزان OD برابر 8/0، غلظت IPTG برابر 1 ميلي مولار و محيط کشت LB بهترين حالت براي توليد پپتيبادي روميپلاستيم نوترکيب بهينه‌سازي شد. بحث و نتيجه‌گيري: از آنجائي که توليد بهينه پپتيبادي موردنظر بود، کلونينگ و بهينه‌سازي شرايط بيان ژن و خالص‌سازي پپتيبادي روميپلاستيم در سويه BL21 از باکتري اشرشيا کلي با بهينه‌ترين شرايط که توسط RSM انجام گرديد، صورت گرفت. همچنين براي اينکه پروتئين به نحو صحيح فولد شود، از مرحله ريفولدينگ در ابتداي خالص‌سازي استفاده شد. پروتئين‌هاي دارويي نقش مهمي در درمان‌هاي نوين پزشکي مولکولي دارند.

Actions (login required)

View Item