هريسچي, عليرضا and قبه, مريم and سليماني, جعفر (2024) مقايسه اثر چند بافر ليزکننده گلبول قرمز بر استخراج DNA ژنومي از نمونه‌هاي خون منجمد در سنجش طول تلومر به روش qPCR. مجله مطالعات علوم پزشکي, 35 (4).
Full text not available from this repository.Abstract
مطالعه طول تلومر براي درک فرآيند پيري و پيشگيري از بيماري‌ها بسيار مهم است. بهينه‌سازي استخراج DNA از نمونه‌هاي خون منجمد براي حفظ طول تلومر اهميت دارد. هدف از اين مطالعه مقايسه اثر چند بافر ليزکننده گلبول قرمز بر استخراج DNA ژنومي از نمونه¬هاي خون منجمد در سنجش طول تلومر به روش qPCR بود.
مواد و روش کار: در اين مطالعه تجربي، براي استخراج DNA از شش بافر مختلف ليز گلبول قرمز به همراه بافر استخراج CTAB استفاده شد. مقدار DNA استخراجي و خلوص آن با استفاده از اندازه‌گيري جذب و نسبت‌هاي ۲۸۰/۲۶۰A و ۲۳۰/۲۶۰A ارزيابي شد. يکپارچگي DNA توسط الکتروفورز ژل آگارز بررسي شد. تکرارپذيري عملکرد بافرها با استفاده از درصد ضريب (%CV) تغييرات براي کميت DNA ارزيابي شد. همچنين، کارايي PCR با بررسي آستانه چرخه (Ct) در qPCR براي هر نمونه با استفاده از معادله رگرسيون خطي و ضريب تعيين (R2) در نرم¬افزار GraphPad Prism v10 گزارش شد. تفاوت‌ها در سطح ۰۵/۰>p معني‌دار در نظر گرفته شد.
يافته‌ها: بافر ليز با ترکيب 10 ميلي¬مولار Tris-HCl 6/7 pH و 10 ميلي¬مولار KCl، منجر به استخراج بيشترين مقدار DNA (ng/µL 01/361) شد. نتايج ژل هيچ‌گونه خردشدگي DNA در نمونه¬ها را نشان نداد. نسبت¬هاي جذبي در مقايسه بين بافرها تفاوت چنداني را نشان ندادند. همچنين DNA استخراجي با بافر ليز با ترکيب 155 ميلي¬مولار NH4Cl، 10 ميلي¬مولار KHCO3، 5 ميلي¬مولار EDTA در مقايسه DNA استخراجي با ساير بافرها درصد ضريب تغييرات براي کميت DNA (7/%6CV=) و ميزان کارايي PCR بهتري (%103Efficiency=، %¬7/99R2=) در 36B4 و (%99Efficiency=، %¬6/99R2=) براي تلومر داشت.
بحث و نتيجه‌گيري: بافر ليز با ترکيب 155 ميلي¬مولار NH4Cl، 10 ميلي¬مولار KHCO3 و 5 ميلي¬مولار EDTA، مؤثرترين عملکرد را در استخراج DNA از نمونه¬هاي خون منجمد جهت مطالعه تلومر داشت. اين بافر با عملکرد بهينه خود، پس از تأييد نهايي توسط مطالعات بيشتر مي¬تواند در کارآزمايي‌ها استفاده شود.
| Item Type: | Article |
|---|---|
| Uncontrolled Keywords: | استخراج DNA، خون منجمد، کارايي PCR، بافر ليزکننده گلبول قرمز، طول تلومر |
| Subjects: | R Medicine > R Medicine (General) |
| Depositing User: | Unnamed user with email gholipour.s@umsu.ac.ir |
| Date Deposited: | 05 Feb 2025 08:30 |
| Last Modified: | 05 Feb 2025 08:30 |
| URI: | https://eprints.umsu.ac.ir/id/eprint/7568 |
Actions (login required)
- View Item